Ациламидазная активность

Испытуемую культуру выращивают на питательной среде Левенштейна-Иенсена или Гельберга. Присутствие формамидазы определяется к моменту наиболее пышного роста (у медленно растущих — на 15-20-й день, у быстрорастущих — на 6-7-й день). Бактериальную массу (две больших петли) снимают с поверхности среды, переносят в центрифужную пробирку, тщательно растирают стеклянной палочкой и добавляют фосфатный буфер рН 7,2. К 0,5 мл бактериальной суспензии добавляют 0,5 мл раствора формамида (0,2 мл на 500 мл дистиллированной воды) и помещают в термостат на 5 часов при 37°. Аммиак, образующийся при ферментации формамида, определяют с помощью известной реакции между аммиаком, фенолом и гипохлоритом в щелочной среде, при которой образуется синего цвета индофенол. Ход реакции следующий: после инкубации к исследуемой смеси добавляют 0,2 мл 0,07% водного раствора MnSo4, 2 мл раствора фенола и 1 мл раствора гипохлорита. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 5 минут. Реакция читается после охлаждения. Синее окрашивание указывает на присутствие аммиака. Ингредиенты для этой реакции готовят по Russel. При определении формамидазной активности рекомендуется проводить контрольные исследования: определять наличие аммиака в опытах без формамида, а также возможное спонтанное присутствие формамидазы (реакция ставится без бактериальной суспензии). Проверочные исследования (М. М. Дыхно и др.) показали, что кислотоупорные сапрофиты неизменно дают положительную реакцию с формамидом (синее окрашивание). Микобактерий туберкулеза человеческого типа, а также бычьего и птичьего типов формамидазной активностью не обладают (реакция отрицательная). Атипичные микобактерий обычно не обладают формамидазной активностью и дают отрицательные реакции, что сближает их с истинными микобактериями туберкулеза. Гидролиз твина. Для дифференциации микобактерий II и III групп показательна реакция гидролиза Твина (Wayne, 1964).