Приготовление плотных питательных сред

Некоторые культуры оказываются устойчивыми к двум или нескольким препаратам в отдельности, по чувствительными к смесям этих препаратов, поэтому, кроме определения лекарственной устойчивости к одному из туберкулостатических средств, определяют их устойчивость к смеси двух или нескольких препаратов. При определении устойчивости к смеси препаратов опыт ставят в пробирке с теми концентрациями препарата в среде, при которых начинает определяться устойчивость, например к смеси 5 мкг/мл стрептомицина и 1 мкг/мл тубазида. После приготовления питательной среды с различными концентрациями антибактериальных препаратов ее сразу разливают в пробирки и свертывают в течение 45 минут при температуре 85-86°. Следует очень внимательно следить за температурой, чтобы не допустить перегрева среды. После засева культуры пробирки с ватно-марлевыми пробками парафинируют или закрывают резиновыми пробками и помещают в полугоризонтальном положении в термостат при 37—38°. Вынимают пробирки через 3 недели после засева и регистрируют полученные результаты. Жидкие питательные среды (полусинтетические или нитратная донорская кровь, приготовленная без консерванта и разведенная стерильной дистиллированной водой), к которым добавлены антибактериальные препараты, разливают по 2 мл в пробирки (обычные или центрифужные). После засева культуры пробирки парафинируют или закрывают резиновыми пробками и помещают в термостат. На 10-14-й день пробирки вынимают из термостата. До того как приготовлять мазки, все пробирки (с полусинтетической средой) либо помещают в кипящую водяную баню на 20-30 минут, либо стерилизуют текучим паром 15-20 минут. Через сутки после стерилизации пробирки открывают, верхний слой жидкости сливают, а из образовавшегося осадка готовят мазки, которые фиксируют над пламенем, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют. В мазках, приготовленных из контрольных пробирок (со средой без антибактериального препарата), отмечается большее количество микроколоний в виде переплетающихся жгутов и кос.